Pagrindinės ląstelių kultūros sąlygos
1. Tinkama ląstelių auginimo terpė
Tinkama ląstelių auginimo terpė yra viena iš svarbiausių sąlygų ląstelių augimui ir dauginimuisi in vitro. Kultivavimo terpė ne tik aprūpina ląsteles ir pagrindines medžiagas, skatinančias ląstelių augimą ir dauginimąsi, bet ir suteikia gyvą aplinką auginamų ląstelių augimui ir dauginimuisi.
2. Kokybiškas serumas
Šiuo metu daugumai sintetinių terpių reikia pridėti serumo. Serumas yra vienas iš svarbiausių ląstelių auginimo terpės komponentų, turintis įvairių augimo faktorių ir kitų ląstelių augimui reikalingų maistinių medžiagų.
3. Pastovi ląstelių augimo temperatūra
Norint palaikyti energingą kultivuojamų ląstelių augimą, turi būti pastovi ir tinkama temperatūra.
4. Tinkama dujų aplinka
Dujos yra viena iš būtinų sąlygų žinduolių ląstelėms išgyventi, o reikalingos dujos daugiausia yra deguonis ir anglies dioksidas.
5. Ląstelių kultūros temperatūra
Norint palaikyti energingą auginamų ląstelių augimą, turi būti pastovi ir tinkama temperatūra. Skirtingų tipų ląstelės turi skirtingus kultūros temperatūros reikalavimus. Standartinė žmogaus ląstelių kultūros temperatūra yra 36,5 ± 0,5 laipsnio. Nukrypimas nuo šio temperatūros diapazono turės įtakos normaliai ląstelių metabolizmui ir netgi mirs.
6. Tinkama dujų aplinka
Dujos yra viena iš būtinų sąlygų žinduolių ląstelių kultūrai išgyventi, o reikalingos dujos daugiausia yra deguonis ir anglies dioksidas. Deguonis dalyvauja trikarboksirūgšties cikle, gamindamas energiją ląstelių augimui ir dauginimuisi bei sintetindamas įvairius komponentus, reikalingus ląstelių augimui.
Dažnas ląstelių kultūros užterštumas
1. Bakterinis užterštumas
Bakterinis užteršimas yra labiausiai paplitęs. Kai operacija bus šiek tiek netinkama, tai sukels ląstelių užteršimą. Po bakterinio užteršimo mikroskopu jis atrodys kaip juodos plonos smėlio juostelės. Strypo formos ir kt. Antra, auginimo terpė pagelsta ir drumsčiasi, o Petri lėkštelėje aiškiai matosi smulkios smėlio formos nuosėdos, kartkartėmis jaučiamas keistas kvapas.
2. Grybelinis užterštumas
Grybeliu užterštos kultūros tirpalas skaidrus ir skaidrus, nepanašus į didelį bakterinės infekcijos protrūkį, todėl anksti jį aptikti sunku. Kartais po mikroskopu jis atrodo kaip siūlelis, kartais – kaip koralas, ir pamažu augs labai plonas juodas siūlelis. Tai Kai jau per vėlu, ląsteles sunku išgelbėti.
3. Užterštumas pelėsiu
Dėl grybelinių infekcijų, nes auginimo terpė yra skaidri, užterštumą grybeliu sunku nustatyti anksti, kai dažnai būna per vėlu. Augalinėje terpėje pamažu atsirado flokuliuojančios priemaišos, o po mikroskopu buvo galima pamatyti siūlinės masės plūduriuojančius objektus, kaip kačiukus vėjyje. Ląstelės vis dar gali augti, tačiau laikui bėgant ląstelės pablogėja ir nustoja augti.
4. Mikoplazminė infekcija
Auginimo terpė tampa drumsta. Mikoplazmai užkrėtus ląsteles, citopatiniai pokyčiai nėra akivaizdūs, tačiau pablogėja ląstelių būklė ir sulėtėja augimas. Po mikroskopu gali būti mažų juodų dėmių, tačiau auginimo terpė paprastai nėra drumsta. Po to, kai ląstelės buvo perduotos, atsirado tarpląstelinių juodų dėmių, ląstelės buvo vakuoliuotos, o daugelis ląstelių buvo panašios į apoptozę ir nekrozę. Galiausiai ląstelės plūduriavo ir visiškai mirė.
Ląstelių užteršimo prevencija
Gerų taisyklių ir reglamentų nustatymas gali labai padėti sumažinti ląstelių užterštumą. Įskaitant prieigos sistemą, veiklos normas ir kasdieninio valdymo sistemą.
Prieigos sistema: įskaitant personalą ir medžiagas. Darbuotojai turi būti apmokyti, kad galėtų dirbti patys, o prieš patekdami į laboratoriją jie turi atitikti dėvėjimo reikalavimus, pvz., baltus chalatus, izoliacinius chalatus, kaukes, pirštines ir tt Reikalingi daiktai turi būti griežti vienkartiniai daiktai. sterilizuoti ir sterilizuoti, o įsigytus daiktus reikia pirkti iš įprastų ir patikimų kanalų. Prieš naudojimą naujai įsigytos ląstelės turi būti išbandytos ir patikrintos.
Darbo specifikacijos: geriausia suformuluoti įprastų operacijų specifikacijas, o laboratorijos darbuotojai turi laikytis darbo specifikacijų, kurių negalima keisti savo nuožiūra, taip pat ugdyti gerus laboratorijos personalo darbo įpročius. Pavyzdžiui, po pipetės antgalio įsiurbimo antrą kartą jis nebus įtrauktas į terpę, o vieną kartą bus įsiurbtas pakankamas terpės kiekis. Įpilant skysčio, skystis turi būti įpilamas kiek įmanoma suspensijos pavidalu, nes tai gali veiksmingai užkirsti kelią mikoplazmos užteršimui ir kryžminiam ląstelių užteršimui. Be to, jei įmanoma, vienu metu eksploatuokite tik vieną ląstelių liniją ir geriau turėti trumpą laiko tarpą tarp ląstelių, kad išvengtumėte kryžminio užteršimo.
Kasdienė valdymo sistema: apima aplinkos ir eksploatacinių medžiagų, reagentų ir tt naudojimo, valymo ir priežiūros taisykles bei metodus. Taip pat valdomas reagentų ir eksploatacinių medžiagų suvartojimas, atsargos ir įsigijimas, įskaitant dviejų lygių atsargų valdymą. ląstelių mėginiai. Taršos šaltiniams, kuriuos nėra lengva rasti, geriausia atlikti reguliarius tyrimus, daugiausia mikoplazmos užterštumo ir kryžminio ląstelių taršos.
„BKMAM Bio“ tiekia atitinkamas eksploatacines medžiagas ląstelių kultūrai:
Vienkartinės plastikinės apvalios/kvadratinės Petri lėkštelės:
Didelio skaidrumo polistirolo medžiaga (PS);
Paviršius yra lygus ir plokščias, o mikroskopu stebint ląstelės nėra optinio iškraipymo;
Krovimo konstrukcija palengvina krovimą ir saugojimą;
Sterilizavimas etileno oksidu (EO);
Atsparumas dilimui ir korozijai.
Ląstelių kultūros indų adhezinis apdorojimas:
Polistirolo medžiaga (PS);
Sterilizavimas elektronų pluoštu, be pirogeno, be toksinų;
Vakuuminis plazminis paviršiaus apdorojimas, puikus ląstelių sukibimas;
Paviršius yra lygus ir plokščias, o mikroskopu stebint ląstelės nėra optinio iškraipymo;
Sukraunamas dizainas palengvina krovimą ir saugojimą.
Plastikinės ląstelių kultūros plokštelės:
Polistirolo medžiaga (PS);
Tinka normaliai ląstelių kultūrai, neprilipusiam apdorojimo plokštelės tipui;
Be pirogeno, be toksinų, sterilizuotas;
Lengva plyšimo tipo nepriklausoma pakuotė, lengvai valdoma;
Priklijuotas ląstelių kultūros plokštelių apdorojimas:
Polistirolo medžiaga (PS);
Adherento apdorojimo (TC apdorojimo) plokštelės tipas, tinkamas prilipusių ląstelių kultūrai;
Be pirogeno, be toksinų, sterilizuotas;
Lengva plyšimo tipo nepriklausoma pakuotė, lengvai valdoma;
Visi plokščiapadžiai.
Tinkamas ląstelių kultūros kolbų apdorojimas:
Polistirolo medžiaga (PS);
Sterilizavimas elektronų pluoštu, be pirogeno, be toksinų;
Vakuuminis plazminis paviršiaus apdorojimas, puikus ląstelių sukibimas;
Kvėpuojantis užvalkalas, skatinantis dujų mainus ir neleidžiantis prasiskverbti mikroorganizmams.
Vidiniai / išoriniai sukimosi kriovialiai:
100 procentų grynos polipropileno medžiagos (PP);
Atlaiko 15psi, 121 laipsnio sterilizaciją;
Vamzdžio sienelė yra sustorėjusi, o vamzdžio korpusas turi mastelį ir rašymo sritį;
Tarp vamzdžio dangtelio sriegio ir vamzdžio korpuso yra silikono žiedinis sandariklis, užtikrinantis sandarumą;
Nėra DNazės, nėra Rnazės, nėra pirogeno, nėra endotoksinų.
