ELISA su blogu rezultatu?Sekite mus, kad išsirinktumėte tinkamą Elisa plokštelę.
Tinkamos ELISA plokštelės pasirinkimas yra pirmas žingsnis į sėkmingą ELISA eksperimentą, tačiau daugelis žmonių į tai nepaiso. Eksperimentuodami žmonės dažnai galvoja tik apie patį eksperimentą, bet nežino, kad produktas dažnai turi didelę įtaką eksperimentui. Tinkamas produktų pasirinkimas prisidės prie eksperimento sėkmės. Atlikdami ELISA eksperimentus paprastai atsižvelgiame į šiuos veiksnius:
1. Apačios forma
Šiuo metu gamintojai fermentais pažymėtus šulinius projektuoja kaip nepriklausomas kolonas ir atitinkamai padidina atstumą tarp šulinių, kad juos būtų galima atskirti atskirai, taip sumažinant kryžminį užteršimą. Skirtingų tipų Elisa plokščių šulinio dugnas yra skirtingas. Štai keletas įprastų skylių dugno formų:
Plokščias dugnas: dugnas yra horizontalus, dar vadinamas F dugnu. Šviesa nebus nukreipta per apačią, kuri gali perduoti šviesą didžiausiu mastu. Naudokite eksperimentams, kuriems dėl matomumo ar kitų priežasčių reikalingas apvalus dugnas.
Apvalus dugnas: taip pat žinomas kaip U formos dugnas, užtikrina geriausius valymo rezultatus ir hibridinį našumą, tinkamas naudoti, kai reikia išbandyti nuosėdas.
C formos dugnas: jis gali užtikrinti gerą valymo efektą tarp plokščio dugno ir apvalaus dugno, kartu derindamas plokščio dugno privalumus.
Kūgio dugnas: Taip pat žinomas kaip V formos dugnas, tinka tiksliai paimti ir laikyti mikro mėginius, kad būtų galima optimaliai atgauti mažus tūrius.
2. Elisa lėkštės spalva
Elisa plokštės yra trijų spalvų: skaidrios, juodos ir baltos.
Dauguma ELISA kaip eksperimentinę medžiagą pasirenka skaidrias plokšteles. Baltos ir juodos Elisa plokštelės dažniausiai naudojamos liuminescencijai aptikti. Pati juoda ELISA plokštelė sugeria šviesą, todėl jos signalas yra silpnesnis nei baltos ELISA plokštelės. Juodosios Elisa plokštelės paprastai naudojamos stipresnei šviesai, pvz., fluorescencijos aptikimui, aptikti; priešingai, baltos Elisa plokštelės gali būti naudojamos silpnesnei šviesai aptikti ir dažnai naudojamos bendrai chemiliuminescencijai ir substrato spalvos kūrimui (pvz., dvigubai luciferazei). reporterio genų analizė).
3. Elisa plokštės medžiaga
Įprastos medžiagos yra polietilenas (PE), polipropilenas (PP), polistirenas (PS), polivinilchloridas (PVC) ir polikarbonatas (PC).
Plačiausiai ELSIA naudojamos medžiagos yra polistirenas ir polivinilchloridas. Minkšta polivinilchlorido plokštė yra plona, ją galima pjaustyti, o kaina nedidelė. Trūkumas yra tas, kad apdaila nėra tokia gera kaip polistireno plokštės, o skylės dugnas nėra toks plokščias kaip polistirenas. Tačiau atitinkama fono reikšmė taip pat padidės. Paprastai ELISA plokštelės paviršiuje atliekamas jonų skiepijimo apdorojimas, o aktyvios funkcinės grupės, tokios kaip aldehido grupės, amino grupės ir epoksidinės grupės, įvedamos į polimero paviršių, siekiant pagerinti substrato paviršiaus veikimą.
4. skirtingi rišimo mechanizmai
Veiksmingas dangos medžiagos prijungimas prie apatinio plokštės paviršiaus yra esminis ELISA žingsnis. Todėl prieš eksperimentą reikia atidžiai išanalizuoti dengiamos medžiagos struktūrines charakteristikas ir chemines savybes, kad būtų galima pasirinkti tinkamą Elisa plokštę. Paprastai tariant, yra keletas būdų, kaip pritvirtinti dangos medžiagą prie plokštės dugno: pasyvioji adsorbcija, kovalentinis surišimas ir afinitetas.
Pasyvi adsorbcija: Pasyviosios adsorbcijos mechanizmas yra sudėtingas, o dangos medžiagos ir plokštės dugno surišimas daugiausia priklauso nuo tarpmolekulinių jėgų (van der Waals jėgos) ir vandenilinių ryšių. Daugumoje ELISA dangos medžiaga jungiasi prie plokštelės dugno pasyvios adsorbcijos būdu. Paprastai vidutinės ir didelės molekulinės masės antigenų (arba antikūnų) ir plokštelės dugno surišimas atliekamas pasyvios adsorbcijos būdu. Renkantis Elisa plokštę, dažnai atsižvelgiama į plokštelės apatinio paviršiaus hidrofobines / hidrofilines savybes. Šioje lentelėje išvardytos skirtingų hidrofilinių substrato paviršių pritaikymo ir naudojimo sritys:
hidrofilinis | Prioritetinis įrišimas | Pagrindinis naudojimas |
- | Molekulės, turinčios reikšmingų hidrofobinių regionų, tokių kaip: lipidai, lipoproteinai, dideli baltymai | Antigeno ELISA, FlA, LIA |
pliusas | Biomolekulės, pasižyminčios hidrofilinėmis/hidrofobinėmis savybėmis, tokiomis kaip: vidutiniai ir dideli baltymai, imunoglobulinai, albuminas | Dvigubo antikūno sumuštinis ELISA, antigenų ELISA |
plius pliusas | Biomolekulės, turinčios hidrofilinių/hidrofobinių savybių, pvz.: nuo mažų iki didelių baltymų, imunoglobulinų, albumino, LPS, fosforilintų baltymų, glikoproteinų | Dvigubo antikūno ELISA, FIA, LIA |
plius plius pliusas | Glikoproteinai, polinės lipidų molekulės, fosfolipidai, kardiolipidai | Antigeno ELISA |
Afiniteto fiksavimas: Afinitetas yra pagrįstas specifiniu pažymėtų makromolekulių prisijungimu prie atitinkamų receptorių. Pažymėtos makromolekulės gali būti gaunamos cheminiu sujungimu arba genų inžinerijos būdu.
„Affinity Capture“ funkcijos yra šios:
1.didelis specifiškumas
2.Gali pagerinti matavimo rezultatų signalo ir triukšmo santykį
Dažniau naudojami šulinio dugno paviršiai: streptavidinu (streptavidinu) padengtas paviršius; nikelio chelatu (Nickel Chelate) padengtas paviršius ir glutationu (Glutationas, GSH) padengtas paviršius.
3. Streptavidino paviršius. Didelis streptavidino ir biotino afinitetas ir specifiškumas yra naudojami siekiant užtikrinti, kad apatinė plokštelė prisijungtų prie padengto baltymo.
4. Nikelio chelato paviršius: nikelio chelatas yra prijungtas prie polimero paviršiaus, kad sujungtų sulietus baltymus His (histidino) žymėmis.
5. Glutationo paviršius: naudojant fermento ir substrato specifiškumą tarp glutationo ir glutationo sulfhidriltransferazės (GST), kad apatinė plokštelė susijungtų su apvalkalo baltymu.
Kodėl verta rinktis BKMAM Elisa plokštę?
Pagaminta iš 100 procentų polistireno medžiagos,
Tinka adhezinei ląstelių kultūrai,
Plokščias pagrindas, vienodo storio ir vienodo dydžio reakcijos poliams,
Sterilus su atskira pakuote,
Aukšta kokybė su gamyklos kaina.
